agtr2_human

NAME

5UNF

ORGANISM

Human (Homo sapiens)

PROTEIN NAME

agtr2_human

SOURCE

SWISSPROT

SEQUENCE

Perspective: Wild-type Construct

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
N-term        
M
K
G
N
S
T
L
A
T
T
10
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
S
K
N
I
T
S
G
L
H
F
20
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
G
L
V
N
I
S
G
N
N
E
30
 
 
 
 
            
                   
S
T
L
N
C
S
Q
K
P
S
40
                   
        TM1      
D
K
H
L
D
A
I
P
I
L
50
                   
                   
Y
Y
I
I
F
V
I
G
F
L
60
                   
                   
V
N
I
V
V
V
T
L
F
C
70
                   
    ICL1   TM2
C
Q
K
G
P
K
K
V
S
S
80
                   
                   
I
Y
I
F
N
L
A
V
A
D
90
                   
                   
L
L
L
L
A
T
L
P
L
W
100
                   
                   
A
T
Y
Y
S
Y
R
Y
D
W
110
                   
ECL1 TM3      
L
F
G
P
V
M
C
K
V
F
120
                   
                   
G
S
F
L
T
L
N
M
F
A
130
                   
                   
S
I
F
F
I
T
C
M
S
V
140
                   
                   
D
R
Y
Q
S
V
I
Y
P
F
150
                   
ICL2   TM4    
L
S
Q
R
R
N
P
W
Q
A
160
                   
                   
S
Y
I
V
P
L
V
W
C
M
170
                   
                   
A
C
L
S
S
L
P
T
F
Y
180
                   
    ECL2        
F
R
D
V
R
T
I
E
Y
L
190
                   
                   
G
V
N
A
C
I
M
A
F
P
200
                   
    TM5          
P
E
K
Y
A
Q
W
S
A
G
210
                   
                   
I
A
L
M
K
N
I
L
G
F
220
                   
                   
I
I
P
L
I
F
I
A
T
C
230
                   
                   
Y
F
G
I
R
K
H
L
L
K
240
                   
  ICL3 TM6    
T
N
S
Y
G
K
N
R
I
T
250
                   
                   
R
D
Q
V
L
K
M
A
A
A
260
                   
                   
V
V
L
A
F
I
I
C
W
L
270
                   
                   
P
F
H
V
L
T
F
L
D
A
280
                   
          ECL3  
L
A
W
M
G
V
I
N
S
C
290
                   
TM7              
E
V
I
A
V
I
D
L
A
L
300
                   
                   
P
F
A
I
L
L
G
F
T
N
310
                   
                   
S
C
V
N
P
F
L
Y
C
F
320
                   
  H8              
V
G
N
R
F
Q
Q
K
L
R
330
         
 
 
 
 
 
                   
S
V
F
R
V
P
I
T
W
L
340
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
C-term        
Q
G
K
R
E
S
M
S
C
R
350
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
K
S
S
S
L
R
E
M
E
T
360
 
 
 
     
F
V
S
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
hemagglutin
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
FLAG            
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
His(10)      
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
TEV proteas
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
BRIL (b562R
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
GSGS            
 
                  
  N-term      
 
C
S
Q
K
P
S
D
K
H
43
                   
  TM1            
L
D
A
I
P
I
L
Y
Y
I
53
                   
                   
I
F
V
I
G
F
L
V
N
I
63
                   
                   
V
V
V
T
L
F
C
C
Q
K
73
                   
ICL1 TM2      
G
P
K
K
V
S
S
I
Y
I
83
                   
                   
F
N
L
A
V
A
D
L
L
L
93
                   
                   
L
A
T
L
P
L
W
A
T
Y
103
                   
        ECL1    
Y
S
Y
R
Y
D
W
L
F
G
113
                   
TM3              
P
V
M
C
K
V
F
G
S
F
123
                   
                   
L
T
L
N
M
F
A
S
I
F
133
                   
                   
F
I
T
C
M
S
V
D
R
Y
143
                   
          ICL2  
Q
S
V
I
Y
P
F
L
S
Q
153
                   
    TM4          
R
R
N
P
W
Q
A
S
Y
I
163
                   
                   
V
P
L
V
W
C
M
A
C
L
173
                   
                   
S
S
L
P
T
F
Y
F
R
D
183
                   
ECL2            
V
R
T
I
E
Y
L
G
V
N
193
                   
                   
A
C
I
M
A
F
P
P
E
K
203
                   
TM5              
Y
A
Q
W
S
A
G
I
A
L
213
                   
                   
M
K
N
I
L
G
F
I
I
P
223
                   
                   
L
I
F
I
A
T
C
Y
F
G
233
                   
                   
I
R
K
H
L
L
K
T
N
S
243
                   
ICL3 TM6      
Y
G
K
N
R
I
T
R
D
Q
253
                   
                   
V
L
K
M
A
A
A
V
V
L
263
                   
                   
A
F
I
I
C
W
L
P
F
H
273
                   
                   
V
L
T
F
L
D
A
L
A
W
283
                   
    ECL3 TM7  
M
G
V
I
N
S
C
E
V
I
293
                   
                   
A
V
I
D
L
A
L
P
F
A
303
                   
                   
I
L
L
G
F
T
N
S
C
V
313
                   
                H8
N
P
F
L
Y
C
F
V
G
N
323
                   
                   
R
F
Q
Q
K
L
R
S
V
F
333
   
 
     
R
V
 

SCHEMATIC

Perspective: Wild-type Construct

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
N-term
 
TM1
 
ICL1
 
TM2
 
ECL1
 
TM3
 
ICL2
 
TM4
 
ECL2
 
TM5
 
ICL3
 
TM6
 
ECL3
 
TM7
 
 
H8
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
C-term

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
hemagg
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
FLAG
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
His(10
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
TEV pr
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
BRIL (
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
GSGS
 
 
 N-term
 
TM1
 
ICL1
 
TM2
 
ECL1
 
TM3
 
ICL2
 
TM4
 
ECL2
 
TM5
 
ICL3
 
TM6
 
ECL3
 
TM7
 
 
H8 


DIAGRAMS

ICL1 K G P K K ICL1ECL1 Y D W L F ECL1ICL2 P F L S Q R R ICL2ECL2 D V R T I E Y L G V N A C I M A F P P E ECL2ICL3 N S Y ICL3ECL3 V I N ECL3N-term M K G N S T L A T T S K N I T S G L H F G L V N I S G N N E S T L N C S Q K P S D K H L N-termC-term I T W L Q G K R E S M S C R K S S S L R E M E T F V S C-term D A I P I L Y Y I I F V I G F L V N I V V V T L F C C Q V S S I Y I F N L A V A D L L L L A T L P L W A T Y Y S Y R G P V M C K V F G S F L T L N M F A S I F F I T C M S V D R Y Q S V I Y N P W Q A S Y I V P L V W C M A C L S S L P T F Y F R K Y A Q W S A G I A L M K N I L G F I I P L I F I A T C Y F G I R K H L L K T G K N R I T R D Q V L K M A A A V V L A F I I C W L P F H V L T F L D A L A W M G S C E V I A V I D L A L P F A I L L G F T N S C V N P F L Y C F V G N R L R S P F Q Q K V F R V

MUTATIONS

Position Wild-type Mutated

DELETIONS

  • from 1 to 34
  • from 336 to 363

    • MODIFICATIONS


    AUXILIARY PROTEINS

    Protein_type: fusion

    Name: BRIL (b562RIL)
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: N-term_4 None:None
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    Protein_type: linker

    Name: GSGS
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: N-term_5 None:None
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    Protein_type: signal

    Name: hemagglutinin
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: N-term_0 None:None
    Presence in Crystal:NO
    Remarks: None

    Protein_type: tag

    Name: FLAG
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: N-term_1 None:None
    Presence in Crystal:NO
    Remarks: None

    Protein_type: tag

    Name: His(10)
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: N-term_2 None:None
    Presence in Crystal:NO
    Remarks: None

    Protein_type: prot_cleavage

    Name: TEV protease
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: N-term_3 None:None
    Presence in Crystal:NO
    Remarks: None

    EXPRESSION

    Expression method Host cell type Host cell Remarks
    Baculovirus Sf21 Insect Bac-to-Bac

    SOLUBILIZATION

    Solvent type Item Concentration
    detergent DDM 0.5 %(w/v)
    additive CHS 0.1 %(w/v)

    Remarks:

    PURIFICATION

    Purification type Description
    Alkylation by Iodoacetamide None
    Proteolysis by TEV protease None

    Remarks:None

    CRYSTALLIZATION

    METHOD: in meso/LCP
    TYPE: lipidic cubic phase (monoolein (9.9 MAG))
    PROTEIN CONCENTRATION: 15 mg/ml
    Temperature: 20°C
    ph : 8.0-8.0

    Remarks: 20% (v/v) 7.9 MAG was added and mixed with the LCP, to absorb the residual precipitant solution and prevent the formation of lamellar crystalline phase + Monoclinic form crystal + in complex Compd1 (XFEL)

    Chemical lists

    Type Item Concentration
    Detergent
    detergent DDM 0.02 %(w/v)
    Lipid
    lipid CHS 0.004 %(w/v)
    LCP lipid additive
    cholesterol 10 %(w/w)
    Additional
    Tris-Hcl, pH 8.0 100.0 mM
    potassium formate 25.0 mM
    PEG400 25.0 %(v/v)
    (+ /− )-2-methyl-2,4-pentanediol 0.3 %(v/v)