aa1r_human

NAME

6D9H

ORGANISM

Human (Homo sapiens)

PROTEIN NAME

aa1r_human

SOURCE

SWISSPROT

SEQUENCE

Perspective: Wild-type Construct

 
                  
N-term TM1  
M
P
P
S
I
S
A
F
Q
A
10
                   
                   
A
Y
I
G
I
E
V
L
I
A
20
                   
                   
L
V
S
V
P
G
N
V
L
V
30
                   
                   
I
W
A
V
K
V
N
Q
A
L
40
                   
ICL1 TM2      
R
D
A
T
F
C
F
I
V
S
50
                   
                   
L
A
V
A
D
V
A
V
G
A
60
                   
                   
L
V
I
P
L
A
I
L
I
N
70
                   
    ECL1 TM3  
I
G
P
Q
T
Y
F
H
T
C
80
                   
                   
L
M
V
A
C
P
V
L
I
L
90
                   
                   
T
Q
S
S
I
L
A
L
L
A
100
                   
                   
I
A
V
D
R
Y
L
R
V
K
110
                   
  ICL2          
I
P
L
R
Y
K
M
V
V
T
120
                   
TM4              
P
R
R
A
A
V
A
I
A
G
130
                   
                   
C
W
I
L
S
F
V
V
G
L
140
                   
          ECL2  
T
P
M
F
G
W
N
N
L
S
150
                   
                   
A
V
E
R
A
W
A
A
N
G
160
                   
                   
S
M
G
E
P
V
I
K
C
E
170
                   
          TM5    
F
E
K
V
I
S
M
E
Y
M
180
                   
                   
V
Y
F
N
F
F
V
W
V
L
190
                   
                   
P
P
L
L
L
M
V
L
I
Y
200
                   
                   
L
E
V
F
Y
L
I
R
K
Q
210
                   
          ICL3  
L
N
K
K
V
S
A
S
S
G
220
                   
TM6              
D
P
Q
K
Y
Y
G
K
E
L
230
                   
                   
K
I
A
K
S
L
A
L
I
L
240
                   
                   
F
L
F
A
L
S
W
L
P
L
250
                   
                   
H
I
L
N
C
I
T
L
F
C
260
                   
ECL3   TM7    
P
S
C
H
K
P
S
I
L
T
270
                   
                   
Y
I
A
I
F
L
T
H
G
N
280
                   
                   
S
A
M
N
P
I
V
Y
A
F
290
                   
  H8              
R
I
Q
K
F
R
V
T
F
L
300
                   
                   
K
I
W
N
D
H
F
R
C
Q
310
                   
        C-term
P
A
P
P
I
D
E
D
L
P
320
           
           
E
E
R
P
D
D
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
hemagglutin
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
FLAG            
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
M4 muscarin
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
PreScission
 
                  
  N-term TM1
 
P
P
S
I
S
A
F
Q
A
10
                   
                   
A
Y
I
G
I
E
V
L
I
A
20
                   
                   
L
V
S
V
P
G
N
V
L
V
30
                   
                   
I
W
A
V
K
V
N
Q
A
L
40
                   
ICL1 TM2      
R
D
A
T
F
C
F
I
V
S
50
                   
                   
L
A
V
A
D
V
A
V
G
A
60
                   
                   
L
V
I
P
L
A
I
L
I
N
70
                   
    ECL1 TM3  
I
G
P
Q
T
Y
F
H
T
C
80
                   
                   
L
M
V
A
C
P
V
L
I
L
90
                   
                   
T
Q
S
S
I
L
A
L
L
A
100
                   
                   
I
A
V
D
R
Y
L
R
V
K
110
                   
  ICL2          
I
P
L
R
Y
K
M
V
V
T
120
                   
TM4              
P
R
R
A
A
V
A
I
A
G
130
                   
                   
C
W
I
L
S
F
V
V
G
L
140
                   
          ECL2  
T
P
M
F
G
W
N
N
L
S
150
                   
                   
A
V
E
R
A
W
A
A
N
G
160
                   
                   
S
M
G
E
P
V
I
K
C
E
170
                   
          TM5    
F
E
K
V
I
S
M
E
Y
M
180
                   
                   
V
Y
F
N
F
F
V
W
V
L
190
                   
                   
P
P
L
L
L
M
V
L
I
Y
200
                   
                   
L
E
V
F
Y
L
I
R
K
Q
210
                   
          ICL3  
L
N
K
K
V
S
A
S
S
G
220
                   
TM6              
D
P
Q
K
Y
Y
G
K
E
L
230
                   
                   
K
I
A
K
S
L
A
L
I
L
240
                   
                   
F
L
F
A
L
S
W
L
P
L
250
                   
                   
H
I
L
N
C
I
T
L
F
C
260
                   
ECL3   TM7    
P
S
C
H
K
P
S
I
L
T
270
                   
                   
Y
I
A
I
F
L
T
H
G
N
280
                   
                   
S
A
M
N
P
I
V
Y
A
F
290
                   
  H8              
R
I
Q
K
F
R
V
T
F
L
300
                   
                   
K
I
W
N
D
H
F
R
C
Q
310
                   
        C-term
P
A
P
P
I
D
E
D
L
P
320
           
           
E
E
R
P
D
D
326
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
PreScission
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
His(8)        

SCHEMATIC

Perspective: Wild-type Construct

 
 
N-term
 
TM1
 
ICL1
 
TM2
 
ECL1
 
TM3
 
ICL2
 
TM4
 
ECL2
 
TM5
 
ICL3
 
TM6
 
ECL3
 
TM7
 
H8
 
C-term

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
hemagg
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
FLAG
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
M4 mus
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
PreSci
 
 
 N-term
 
TM1
 
ICL1
 
TM2
 
ECL1
 
TM3
 
ICL2
 
TM4
 
ECL2
 
TM5
 
ICL3
 
TM6
 
ECL3
 
TM7
 
H8
 
C-term
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
PreSci
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
His(8)


DIAGRAMS

ICL1 Q A L R ICL1ECL1 P Q T ECL1ICL2 P L R Y K M V V ICL2ECL2 W N N L S A V E R A W A A N G S M G E P V I K C E F E K V I ECL2ICL3 S A S S G ICL3ECL3 P S C H K ECL3N-term M P P S I N-termC-term I D E D L P E E R P D D C-term S A F Q A A Y I G I E V L I A L V S V P G N V L V I W A V K V N D A T F C F I V S L A V A D V A V G A L V I P L A I L I N I G Y F H T C L M V A C P V L I L T Q S S I L A L L A I A V D R Y L R V K I T P R R A A V A I A G C W I L S F V V G L T P M F G S M E Y M V Y F N F F V W V L P P L L L M V L I Y L E V F Y L I R K Q L N K K V D P Q K Y Y G K E L K I A K S L A L I L F L F A L S W L P L H I L N C I T L F C P S I L T Y I A I F L T H G N S A M N P I V Y A F R I Q K F L K H F R P P F R V T I W N D C Q P A

MUTATIONS

Position Wild-type Mutated

DELETIONS

  • from 1 to 1

    • MODIFICATIONS


    AUXILIARY PROTEINS

    Protein_type: signal

    Name: hemagglutinin
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: N-term_0 None:None
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    Protein_type: tag

    Name: FLAG
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: N-term_1 None:None
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    Protein_type: tag

    Name: M4 muscarinic receptor (22AA)
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: N-term_2 None:None
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    Protein_type: prot_cleavage

    Name: PreScission site
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: N-term_3 None:None
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    Protein_type: prot_cleavage

    Name: PreScission site
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: C-term_4 None:None
    Presence in Crystal:NO
    Remarks: None

    Protein_type: tag

    Name: His(8)
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: C-term_5 None:None
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    EXPRESSION

    Expression method Host cell type Host cell Remarks
    Baculovirus Hi5 Insect

    SOLUBILIZATION

    Solvent type Item Concentration
    detergent LMNG 0.5 %w/v
    additive CHS 0.01 %w/v

    Remarks:

    PURIFICATION

    Purification type Description
    NONE None

    Remarks:None

    CRYSTALLIZATION

    METHOD: Cryo-EM
    TYPE: Volta phase plate(FEI), FEI Titan Krios@300kV, Gatan K2 Summit direct electron camera , Gatan Quantum energy filter ()
    PROTEIN CONCENTRATION: 1.3 mg/ml
    Temperature: 4°C
    ph : 7.4-7.4

    Remarks: Gi2-heterotrimer, cryoEM: 3220 movies collected

    Chemical lists

    Type Item Concentration
    Detergent
    LMNG 0.01 %v/v
    Lipid
    CHS 90.001 %v/v
    Additional
    Apyrase 25.0 mU/ml
    Buffer HEPES 7.4 20.0 mM
    NaCl 100.0 mM
    MgCl2 5.0 mM