aa2ar_human

NAME

6GDG

ORGANISM

Human (Homo sapiens)

PROTEIN NAME

aa2ar_human

SOURCE

SWISSPROT

SEQUENCE

Perspective: Wild-type Construct

 
 
 
 
 
 
 
      
TM1              
M
P
I
M
G
S
S
V
Y
I
10
                   
                   
T
V
E
L
A
I
A
V
L
A
20
                   
                   
I
L
G
N
V
L
V
C
W
A
30
                   
        ICL1    
V
W
L
N
S
N
L
Q
N
V
40
                   
TM2              
T
N
Y
F
V
V
S
L
A
A
50
                   
                   
A
D
I
A
V
G
V
L
A
I
60
                   
                   
P
F
A
I
T
I
S
T
G
F
70
                   
ECL1 TM3      
C
A
A
C
H
G
C
L
F
I
80
                   
                   
A
C
F
V
L
V
L
T
Q
S
90
                   
                   
S
I
F
S
L
L
A
I
A
I
100
                   
                   
D
R
Y
I
A
I
R
I
P
L
110
                   
ICL2     TM4  
R
Y
N
G
L
V
T
G
T
R
120
                   
                   
A
K
G
I
I
A
I
C
W
V
130
                   
                   
L
S
F
A
I
G
L
T
P
M
140
                   
    ECL2        
L
G
W
N
N
C
G
Q
P
K
150
     
 
            
                   
E
G
K
N
H
S
Q
G
C
G
160
                   
                   
E
G
Q
V
A
C
L
F
E
D
170
                   
    TM5          
V
V
P
M
N
Y
M
V
Y
F
180
                   
                   
N
F
F
A
C
V
L
V
P
L
190
                   
                   
L
L
M
L
G
V
Y
L
R
I
200
                   
                   
F
L
A
A
R
R
Q
L
K
Q
210
                   
      ICL3      
M
E
S
Q
P
L
P
G
E
R
220
                   
TM6              
A
R
S
T
L
Q
K
E
V
H
230
                   
                   
A
A
K
S
L
A
I
I
V
G
240
                   
                   
L
F
A
L
C
W
L
P
L
H
250
                   
                   
I
I
N
C
F
T
F
F
C
P
260
                   
ECL3   TM7    
D
C
S
H
A
P
L
W
L
M
270
                   
                   
Y
L
A
I
V
L
S
H
T
N
280
                   
                   
S
V
V
N
P
F
I
Y
A
Y
290
                   
  H8              
R
I
R
E
F
R
Q
T
F
R
300
                   
                   
K
I
I
R
S
H
V
L
R
Q
310
           
 
 
 
 
        C-term
Q
E
P
F
K
A
A
G
T
S
320
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
A
R
V
L
A
A
H
G
S
D
330
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
G
E
Q
V
S
L
R
L
N
G
340
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
H
P
P
G
V
W
A
N
G
S
350
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
A
P
H
P
E
R
R
P
N
G
360
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
Y
A
L
G
L
V
S
G
G
S
370
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
A
Q
E
S
Q
G
N
T
G
L
380
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
P
D
V
E
L
L
S
H
E
L
390
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
K
G
V
C
P
E
P
P
G
L
400
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
D
D
P
L
A
Q
D
G
A
G
410
 
 
   
V
S
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
GP67 signal
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
His(10)      
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
TEV proteas
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
TrXA            
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
EAAAKA        
 
                  
  TM1            
 
V
Y
I
T
V
E
L
A
I
16
                   
                   
A
V
L
A
I
L
G
N
V
L
26
                   
                   
V
C
W
A
V
W
L
N
S
N
36
                   
ICL1 TM2      
L
Q
N
V
T
N
Y
F
V
V
46
                   
                   
S
L
A
A
A
D
I
A
V
G
56
                   
                   
V
L
A
I
P
F
A
I
T
I
66
                   
      ECL1 TM3
S
T
G
F
C
A
A
C
H
G
76
                   
                   
C
L
F
I
A
C
F
V
L
V
86
                   
                   
L
T
Q
S
S
I
F
S
L
L
96
                   
                   
A
I
A
I
D
R
Y
I
A
I
106
                   
    ICL2        
R
I
P
L
R
Y
N
G
L
V
116
                   
TM4              
T
G
T
R
A
K
G
I
I
A
126
                   
                   
I
C
W
V
L
S
F
A
I
G
136
                   
            ECL2
L
T
P
M
L
G
W
N
N
C
146
             
 
    
                   
G
Q
P
K
E
G
K
A
H
S
156
                   
                   
Q
G
C
G
E
G
Q
V
A
C
166
                   
            TM5  
L
F
E
D
V
V
P
M
N
Y
176
                   
                   
M
V
Y
F
N
F
F
A
C
V
186
                   
                   
L
V
P
L
L
L
M
L
G
V
196
                   
                   
Y
L
R
I
F
L
A
A
R
R
206
                   
                   
Q
L
K
Q
M
E
S
Q
P
L
216
                   
ICL3 TM6      
P
G
E
R
A
R
S
T
L
Q
226
                   
                   
K
E
V
H
A
A
K
S
L
A
236
                   
                   
I
I
V
G
L
F
A
L
C
W
246
                   
                   
L
P
L
H
I
I
N
C
F
T
256
                   
      ECL3      
F
F
C
P
D
C
S
H
A
P
266
                   
TM7              
L
W
L
M
Y
L
A
I
V
L
276
                   
                   
S
H
T
N
S
V
V
N
P
F
286
                   
          H8      
I
Y
A
Y
R
I
R
E
F
R
296
                   
                   
Q
T
F
R
K
I
I
R
S
H
306
                   
 
                     
V
L
R
Q
Q
E
P
F
K
A
 
316

SCHEMATIC

Perspective: Wild-type Construct

 
 
 
 
 
TM1
 
ICL1
 
TM2
 
ECL1
 
TM3
 
ICL2
 
TM4
 
 
 
ECL2
 
TM5
 
ICL3
 
TM6
 
ECL3
 
TM7
 
H8
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
C-term

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
GP67 s
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
His(10
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
TEV pr
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
TrXA
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
EAAAKA
 
 
 
 TM1
 
ICL1
 
TM2
 
ECL1
 
TM3
 
ICL2
 
TM4
 
 
 
ECL2
 
TM5
 
ICL3
 
TM6
 
ECL3
 
TM7
 
H8
 
 
C-term 


DIAGRAMS

ICL1 S N L Q ICL1ECL1 F C A ECL1ICL2 P L R Y N G L V ICL2ECL2 W N N C G Q P K E G K N H S Q G C G E G Q V A C L F E D V V ECL2ICL3 Q P L P G ICL3ECL3 P D C S H A ECL3C-term K A A G T S A R V L A A H G S D G E Q V S L R L N G H P P G V W A N G S A P H P E R R P N G Y A L G L V S G G S A Q E S Q G N T G L P D V E L L S H E L K G V C P E P P G L D D P L A Q D G A G V S C-term M P I M G S S V Y I T V E L A I A V L A I L G N V L V C W A V W L N N V T N Y F V V S L A A A D I A V G V L A I P F A I T I S T G A C H G C L F I A C F V L V L T Q S S I F S L L A I A I D R Y I A I R I T G T R A K G I I A I C W V L S F A I G L T P M L G P M N Y M V Y F N F F A C V L V P L L L M L G V Y L R I F L A A R R Q L K Q M E S E R A R S T L Q K E V H A A K S L A I I V G L F A L C W L P L H I I N C F T F F C P L W L M Y L A I V L S H T N S V V N P F I Y A Y R I R E F R K H V L P F F R Q T I I R S R Q Q E

MUTATIONS

Position Wild-type Mutated
154 |  N A

DELETIONS

  • from 1 to 7
  • from 317 to 412

    • MODIFICATIONS


    AUXILIARY PROTEINS

    Protein_type: signal

    Name: GP67 signal
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: N-term_0 None:None
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    Protein_type: tag

    Name: His(10)
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: N-term_1 None:None
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    Protein_type: prot_cleavage

    Name: TEV protease
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: N-term_2 None:None
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    Protein_type: fusion

    Name: TrXA
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: N-term_3 None:None
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    Protein_type: linker

    Name: EAAAKA
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: N-term_4 None:None
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    EXPRESSION

    Expression method Host cell type Host cell Remarks
    Baculovirus Tni PRO (Trichoplusia ni) cell lines Insect BAC ULTRA system (Oxford Expression Technologies).

    SOLUBILIZATION

    Solvent type Item Concentration
    detergent DM 2 %w/v

    Remarks:

    PURIFICATION

    Purification type Description
    Proteolysis by TEV protease None

    Remarks:None

    CRYSTALLIZATION

    METHOD: Cryo-EM
    TYPE: Falcon III detector , 300kV, FEI TITAN Krios microscope, Volta PhasePlate, GIF-quantum energy filter (Gatan) ()
    PROTEIN CONCENTRATION: 1.0 mg/ml
    Temperature: 4°C
    ph : 7.5-7.5

    Remarks: Mini-Gs_Gbg + agonist NECA +Nb35; 837 movies collected

    Chemical lists

    Type Item Concentration
    Additional
    Apyrase 0.1 U/ml
    Buffer HEPES pH 7.5 20.0 mM
    NaCl 100.0 mM
    Detergent
    LMNG 0.1 % v/v