5ht1b_human

NAME

4IAR

ORGANISM

Human (Homo sapiens)

PROTEIN NAME

5ht1b_human

SOURCE

SWISSPROT

SEQUENCE

Perspective: Wild-type Construct

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
N-term        
M
E
E
P
G
A
Q
C
A
P
10
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
P
P
P
A
G
S
E
T
W
V
20
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
P
Q
A
N
L
S
S
A
P
S
30
 
 
                
                   
Q
N
C
S
A
K
D
Y
I
Y
40
                   
        TM1      
Q
D
S
I
S
L
P
W
K
V
50
                   
                   
L
L
V
M
L
L
A
L
I
T
60
                   
                   
L
A
T
T
L
S
N
A
F
V
70
                   
                   
I
A
T
V
Y
R
T
R
K
L
80
                   
ICL1 TM2      
H
T
P
A
N
Y
L
I
A
S
90
                   
                   
L
A
V
T
D
L
L
V
S
I
100
                   
                   
L
V
M
P
I
S
T
M
Y
T
110
                   
      ECL1 TM3
V
T
G
R
W
T
L
G
Q
V
120
                   
                   
V
C
D
F
W
L
S
S
D
I
130
             
 
    
                   
T
C
C
T
A
S
I
L
H
L
140
                   
                   
C
V
I
A
L
D
R
Y
W
A
150
                   
      ICL2      
I
T
D
A
V
E
Y
S
A
K
160
                   
  TM4            
R
T
P
K
R
A
A
V
M
I
170
                   
                   
A
L
V
W
V
F
S
I
S
I
180
                   
                   
S
L
P
P
F
F
W
R
Q
A
190
                   
ECL2            
K
A
E
E
E
V
S
E
C
V
200
                   
        TM5      
V
N
T
D
H
I
L
Y
T
V
210
                   
                   
Y
S
T
V
G
A
F
Y
F
P
220
                   
                   
T
L
L
L
I
A
L
Y
G
R
230
                 
 
                   
I
Y
V
E
A
R
S
R
I
L
240
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
        ICL3    
K
Q
T
P
N
R
T
G
K
R
250
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
L
T
R
A
Q
L
I
T
D
S
260
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
P
G
S
T
S
S
V
T
S
I
270
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
N
S
R
V
P
D
V
P
S
E
280
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
S
G
S
P
V
Y
V
N
Q
V
290
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
K
V
R
V
S
D
A
L
L
E
300
 
 
 
 
 
          
    TM6          
K
K
K
L
M
A
A
R
E
R
310
                   
                   
K
A
T
K
T
L
G
I
I
L
320
                   
                   
G
A
F
I
V
C
W
L
P
F
330
                   
                   
F
I
I
S
L
V
M
P
I
C
340
                   
ECL3     TM7  
K
D
A
C
W
F
H
L
A
I
350
                   
                   
F
D
F
F
T
W
L
G
Y
L
360
                   
                   
N
S
L
I
N
P
I
I
Y
T
370
                   
    H8            
M
S
N
E
D
F
K
Q
A
F
380
                   
        C-term
H
K
L
I
R
F
K
C
T
S
390
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
HA tag        
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
FLAG            
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
His(10)      
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
TEV proteas
 
                  
  N-term      
 
C
S
A
K
D
Y
I
Y
Q
41
                   
      TM1        
D
S
I
S
L
P
W
K
V
L
51
                   
                   
L
V
M
L
L
A
L
I
T
L
61
                   
                   
A
T
T
L
S
N
A
F
V
I
71
                   
            ICL1
A
T
V
Y
R
T
R
K
L
H
81
                   
TM2              
T
P
A
N
Y
L
I
A
S
L
91
                   
                   
A
V
T
D
L
L
V
S
I
L
101
                   
                   
V
M
P
I
S
T
M
Y
T
V
111
                   
    ECL1 TM3  
T
G
R
W
T
L
G
Q
V
V
121
                   
                   
C
D
F
W
L
S
S
D
I
T
131
           
 
      
                   
C
C
T
A
S
I
W
H
L
C
141
                   
                   
V
I
A
L
D
R
Y
W
A
I
151
                   
    ICL2        
T
D
A
V
E
Y
S
A
K
R
161
                   
TM4              
T
P
K
R
A
A
V
M
I
A
171
                   
                   
L
V
W
V
F
S
I
S
I
S
181
                   
            ECL2
L
P
P
F
F
W
R
Q
A
K
191
                   
                   
A
E
E
E
V
S
E
C
V
V
201
                   
      TM5        
N
T
D
H
I
L
Y
T
V
Y
211
                   
                   
S
T
V
G
A
F
Y
F
P
T
221
                   
                   
L
L
L
I
A
L
Y
G
R
I
231
               
 
                 
Y
V
E
A
R
S
R
I
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
BRIL (b562R
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
               
TM6          
A
A
R
E
R
K
A
T
313
                   
                   
K
T
L
G
I
I
L
G
A
F
323
                   
                   
I
V
C
W
L
P
F
F
I
I
333
                   
                   
S
L
V
M
P
I
C
K
D
A
343
                   
ECL3 TM7      
C
W
F
H
L
A
I
F
D
F
353
                   
                   
F
T
W
L
G
Y
L
N
S
L
363
                   
                   
I
N
P
I
I
Y
T
M
S
N
373
                   
H8                
E
D
F
K
Q
A
F
H
K
L
383
             
  C-term
I
R
F
K
C
T
S
390

SCHEMATIC

Perspective: Wild-type Construct

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
N-term
 
TM1
 
ICL1
 
TM2
 
ECL1
 
 
 
TM3
 
ICL2
 
TM4
 
ECL2
 
 
 
 
TM5
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
ICL3
 
 
 
TM6
 
ECL3
 
TM7
 
H8
 
C-term

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
HA tag
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
FLAG
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
His(10
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
TEV pr
 
 
 N-term
 
TM1
 
ICL1
 
TM2
 
ECL1
 
 
 
TM3
 
ICL2
 
TM4
 
ECL2
 
 
TM5 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
BRIL (
 
 
TM6
 
ECL3
 
TM7
 
H8
 
C-term


DIAGRAMS

ICL1 R K L H ICL1ECL1 R W T L ECL1ICL2 A V E Y S A K R ICL2ECL2 R Q A K A E E E V S E C V V N T D ECL2ICL3 N R T G K R L T R A Q L I T D S P G S T S S V T S I N S R V P D V P S E S G S P V Y V N Q V K V R V S D A L L E K K ICL3ECL3 K D A C W F ECL3N-term M E E P G A Q C A P P P P A G S E T W V P Q A N L S S A P S Q N C S A K D Y I Y Q D S I N-termC-term R F K C T S C-term S L P W K V L L V M L L A L I T L A T T L S N A F V I A T V Y R T T P A N Y L I A S L A V T D L L V S I L V M P I S T M Y T V T G G Q V V C D F W L S S D I T C C T A S I L H L C V I A L D R Y W A I T D T P K R A A V M I A L V W V F S I S I S L P P F F W H I L Y T V Y S T V G A F Y F P T L L L I A L Y G R I Y V E A R S R I L K Q T P K L M A A R E R K A T K T L G I I L G A F I V C W L P F F I I S L V M P I C H L A I F D F F T W L G Y L N S L I N P I I Y T M S N E D F H K F K Q A L I

MUTATIONS

Position Wild-type Mutated
138 |  L W

DELETIONS

  • from 1 to 32
  • from 240 to 305

    • MODIFICATIONS


    AUXILIARY PROTEINS

    Protein_type: tag

    Name: HA tag
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: N-term_0 None:None
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    Protein_type: tag

    Name: FLAG
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: N-term_1 None:None
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    Protein_type: tag

    Name: His(10)
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: N-term_2 None:None
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    Protein_type: prot_cleavage

    Name: TEV protease
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: N-term_3 None:None
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    Protein_type: fusion

    Name: BRIL (b562RIL)
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: Within Receptor_4 240:305
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    EXPRESSION

    Expression method Host cell type Host cell Remarks
    Baculovirus Sf9 Insect pFastBac1-833100, Bac-to-Bac

    SOLUBILIZATION

    Solvent type Item Concentration
    detergent DDM 1.0 %w/v
    additive CHS 0.2 %w/v

    Remarks:

    PURIFICATION

    Purification type Description
    Alkylation by Iodoacetamide None
    Proteolysis by TEV protease None

    Remarks:None

    CRYSTALLIZATION

    METHOD: in meso/LCP
    TYPE: lipidic cubic phase (LCP) (monoolein (9.9 MAG))
    PROTEIN CONCENTRATION: 50-80 mg/ml
    Temperature: 20°C
    ph : 7.5-7.5

    Remarks: The protein-LCP mixture contained 40% (w/w) proteinsolution, 54% (w/w) monoolein (Sigma) and 6% (w/w) cholesterol

    Chemical lists

    Type Item Concentration
    Additional
    unknown Tris pH 7.5 100 mM
    unknown PEG 400 30 %v/v
    unknown Lithium chloride 400 mM
    Detergent
    DDM 0.05 %w/v
    Detergent additive
    CHS 0.01 %w/v